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【飛諾美色譜】色譜小知識丨什么是柱外體積？
更新時間：2024-12-02
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柱外體積是液相色譜中死體積重要的組成部分，它包括進樣器體積，混合器體積，色譜柱前后連接管路的體積，連接配件等所產生的空間，以及檢測器流通池體積。根據您使用的系統和應用，在HPLC上開發超高性能方法需要優化上述配件以減少柱外體積。
測量柱外體積的方法
等度法
等度方法的系統體積測量相當簡單，可以直接在系統上進行，而無需更改流動相。首先，取出HPLC色譜柱并用零死體積兩通替換色譜柱。然后以固定流速啟動HPLC，并在系統中注入少量丙酮或其他有UV吸收組分，并在270nm或220nm處進行監測。從丙酮進樣到色譜圖中開始出峰的時間表明了系統的柱外體積。計算方法如下：
調整進樣器和色譜柱入口之間的流路以及柱后流路可以減小該體積。
梯度法
雖然梯度法的柱外體積測量并不像等度法那么簡單，但它操作起來也并不復雜。首先，取出HPLC色譜柱并用零死體積兩通替換色譜柱。一個流動相是水，另一相是乙腈，并在流動相B中添加一定量的丙酮，此時需要切換流動相，并在適當的波長下監測紫外線以檢測丙酮（220nm或270nm都可以）。梯度法即系統保持在100%A（1-2分鐘），然后在幾分鐘內從0%至100%B梯度。從梯度開始時間到UV信號基線上升的時間延遲即為總的系統體積。計算也很簡單：
梯度法柱外體積測試方法作為優化HPLC系統的重要工具，以更好的配合核殼填料（Kinetex）的柱效優勢。在柱外體積測試期間，也可以交替使用進樣器旁路與主路，以查看進樣器回路對整個HPLC系統死體積的影響。
