生物探索 | 不同色譜柱硬件對合成寡核苷酸液相質譜分析的影響

更新時間：2024-12-06

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【飛諾美色譜】治療性寡核苷酸代表了目前制藥行業的新突破。提高寡核苷酸藥物合成路線的可靠性并且加上新藥輸送技術在臨床運用上會得到高度的重視。在色譜分析中，寡核苷酸藥物的高極性與其磷酸二酯骨架對分析來說是一個極大的挑戰。因此，使用離子對反相色譜分析（IP-RPLC）是必要的，一般來說，常規的流動相會使用烷基胺離子對試劑和全氟醇（如：HFIP）組成。

雖然，通過優化離子對色譜流動相的比例能有效地提高色譜分離的效果，但是這也無法改變寡核苷酸對傳統不銹鋼色譜柱硬件中微量金屬的螯合作用。在這里，我們通過對兩種合成寡核苷酸的液相質譜分析來對比傳統不銹鋼色譜柱和BioTi（多層鈦合金柱管提供生物惰性通道）硬件色譜柱對分析結果的影響。

當通過LC-MS分析雙鏈RNA的時候，如圖1所示，我們觀測到非特定的相互作用。結果顯示，在反鏈峰被洗脫下來前我們看到了一個分叉峰，通過MS/MS掃描后我們確定這個分叉峰是同一個分析物。反之，如圖2所示，通過使用BioTi生物惰性硬件的色譜柱則有效地清晰分離雙鏈RNA中的正反鏈并且通過質譜數據的驗證。此外，我們還觀測到在使用帶有BioTi硬件的色譜柱時，分析結果的靈敏度，峰高以及峰面積有顯著的提高。從而表明BioTi能有效地在低濃度離子對試劑及HFIP條件下對寡核苷酸進行表征分析。

這種在電離方面的改進也可以在單鏈核酸分析中觀測到。通過對Nusinersen的分析發現BioTi能有效地改善色譜柱的靈敏度; 如圖3所示，與使用不銹鋼硬件的色譜柱結果對比，使用bioZen Oligo（BioTi硬件）時，分析靈敏度有了大幅度的提高。同時，此兩款色譜柱的色譜填料是同一個批次的填料。

綜上所述

從以上結果得出，使用生物惰性硬件的色譜柱不僅可以改善寡核苷酸在色譜分析中的效果和穩定性，而且還可以大幅度地提高靈敏度，從而達到對合成寡核苷酸定量和表征的要求。

液相色譜條件（圖1，2）：

色譜柱：

bioZen™ 2.6 µm Oligo (BioTi)

Clarity® 2.6 µm Oligo-XT (Stainless Steel)

規格：100 x 2.1 mm

產品貨號：

00D-4790-AN

00D-4746-AN

流動相：